動物細胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史

19世紀(jì)30年代，科學(xué)家們相繼在肺結(jié)核、天花、水痘、麻疹等**患者的病理組織中觀察到多核細胞。19世紀(jì)70年代，科學(xué)家們在蛙的血細胞中也看到了多核細胞的現(xiàn)象，但是由于受當(dāng)時科學(xué)技術(shù)發(fā)展水平的限制，人們對這一現(xiàn)象并沒有給予足夠的重視。1958年，日本科學(xué)家崗田用滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)人的腹水癌細胞融合成功。后來科學(xué)家們又成功地誘導(dǎo)了不同種動物的體細胞融合，并且能將雜種細胞培養(yǎng)成活。隨著細胞融合技術(shù)的不斷改進，現(xiàn)在這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細胞學(xué)、遺傳學(xué)、**學(xué)、病毒學(xué)等多種學(xué)科的研究工作中。 

通過培養(yǎng)和誘導(dǎo)，兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程稱為細胞融合（cell fusion）或細胞雜交（cell hybridization）。 

基因型相同的細胞融合成的雜交細胞稱為同核體（homokaryon）；來自不同基因型的雜交細胞則稱為異核體（heterokaryon）。 

同種細胞在培養(yǎng)時2個靠在一起的細胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合；異種間的細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合，稱誘發(fā)融合。 

誘導(dǎo)細胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（電激和激光）。某些病毒如：仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介導(dǎo)病毒同宿主細胞融合，也可介導(dǎo)細胞與細胞的融合，因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導(dǎo)細胞融合。化學(xué)和物理方法可造成膜脂分子排列的改變，去掉作用因素之后，質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)，在恢復(fù)過程中便可誘導(dǎo)相接觸的細胞發(fā)生融合。 

細胞融合不僅可用于基礎(chǔ)研究，而且還有重要的應(yīng)用價值，在植物育種方面已經(jīng)成功的有蘿卜+甘藍、粉藍**+郎氏**、番茄+馬鈴薯等等。
 
1957年，日本學(xué)者岡田善雄在培養(yǎng)動物細胞時加入失去活性的仙臺病毒，發(fā)現(xiàn)能使兩個動物細胞融合，產(chǎn)生具有兩個核的細胞。研究表明，很多不同種的動物細胞都能進行融合，形成雜種細胞。如人－鼠、人－兔、人－雞、人－蛙、鼠－雞、鼠－兔、鼠－猴等等。細胞融合的具體步驟包括： 

（１）細胞準(zhǔn)備。分貼壁和懸浮細胞兩種。前者可直接將兩親本細胞混合培養(yǎng)，后者需制成一定濃度的細胞懸浮液。 

（２）細胞融合，加促融因子于將行融合的細胞之中，誘導(dǎo)融合。 

（３）雜種細胞選擇。利用選擇性培養(yǎng)基等，使親本細胞死亡，而讓雜種細胞存活。 

（４）雜種細胞克隆。對選出的雜種細胞進行克?。ㄟx擇與純化），經(jīng)過培養(yǎng)，就能獲得所需要的無

          性繁殖系。 

植物細胞融合較動物細胞難些。

首先，植物細胞外面有細胞壁，因此需要先用纖維素酶去壁，形成原生質(zhì)體后，才能進行細胞融合。
其次，植物細胞融合后形成的雜種細胞，經(jīng)過培養(yǎng)有可能分化發(fā)育成植株，而動物細胞的雜種細胞則缺乏此種能力。

植物體細胞融合的過程大致包括：細胞分離，原生質(zhì)體制備，原生質(zhì)體融合，雜種細胞篩選及其培養(yǎng)，然后再通過愈傷組織誘導(dǎo)分化出根、莖、葉，*后長成完整的體細胞雜種植株。植物細胞融合技術(shù)不僅打破了常規(guī)有性雜交育種的親和性障礙，而且為實現(xiàn)“超遠緣雜交”提供了可能，有重大的應(yīng)用價值。